明膠空心膠囊中鉻超標事件應急檢驗方法-答疑匯總

————北京安合美誠科學儀器有限公司

一、樣品前處理

1、供試品溶液的制備中供試品取樣量0.5g，是否過大（可能導致消解罐壓力過大，防爆膜破裂，使消解失敗）。

答：取樣量不能再減少，否則樣品的代表性會降低。出現(xiàn)爆罐主要是預消解時間不夠，可用延長預消解的方法解決。

2、樣品前處理必須過夜嗎？

答：不一定，按照藥典方法操作需要過夜，如果不過夜的，需要作方法學驗證。

3、樣品是否需要粉碎，樣品的均勻性如何保證？

答：空心膠囊不需要粉碎，但應成對稱取囊帽和囊體后進行消解，由于囊帽和囊體鉻含量不同，進行粉碎后，樣品的均勻性無法保證。

4、消解過程中加氫氟酸會對檢測結果有影響嗎？

答：某些明膠空心膠囊配方中加入了二氧化鈦遮光劑，僅加硝酸無法消解二氧化鈦，會產(chǎn)生消解液渾濁現(xiàn)象，故加入氫氟酸消解，使供試品溶液澄清透明，但要進行方法學驗證。

5、消解過程中發(fā)現(xiàn)只加入10ml硝酸消解時，受消解過程中產(chǎn)生的氮氧化物影響消解罐容易變黃，影響下次使用。可加入硝酸后再加入適量的雙氧水（2～3ml）消化，能有效減少該現(xiàn)象的發(fā)生。經(jīng)驗證，加入雙氧水與不加相比，結果并無差異。

答：在消解過程中是否加入雙氧水，以及加入體積需要進行必要的方法學驗證。同時，消解罐每次使用后，需經(jīng)酸浸泡或加入硝酸空白消解清洗后方可使用。

6、由于膠囊殼在消解時反應劇烈，可以根據(jù)不同品牌消解爐和消解罐的大小和承受壓力確定樣品取樣量、加熱的功率和時間嗎？

答：消解過程在藥典方法中未明確規(guī)定。各單位可根據(jù)現(xiàn)有儀器，對消解過程的*性和安全性進行必要的驗證，并不需要*相同，指導原則中的消解條件僅供參考。

二、樣品測定

1、膠囊中鉻含量測定如何統(tǒng)一、規(guī)范的排除藥物的干擾，保證各個實驗室的結果的一致。

答：排除藥物的干擾，即必須將膠囊劑樣品中的內(nèi)容物清除干凈。可參照《中國藥典》2010年版（二部）附錄IE膠囊劑的裝量差異項下操作。

2、由于鉻的原子化溫度較高，對石墨爐原子吸收分光光度計使用的石墨管損壞較大，建議根據(jù)檢測情況及時采取相應的措施（如測定5個樣品左右后插入標準溶液進行校正，10個樣品左右重新測定標準曲線，根據(jù)檢測情況及時更換石墨管）。

答：同意上述觀點，建議每測定5～10份樣品后，測定質(zhì)控樣品，如果質(zhì)控樣品變化較大，則需要重新測定標準曲線。

3、原子化階段，在2400℃峰出現(xiàn)拖尾，如何解決？

答：原子吸收測定是峰高，出現(xiàn)拖尾不影響峰高的測量，但要注意測量后基線是否能夠恢復到以前的水平，如果基線不能恢復，則應進行石墨管的空燒，放置石墨管污染。

4、石墨爐測試條件的灰化溫度過低（有資料顯示不加基體改進劑死灰化溫度應達到1200℃），且原子化溫度也過低（有資料顯示原子化溫度應達到2500℃）原子化不*，造成記憶效應不易消除，使結果重現(xiàn)性較差。

答：原子化溫度過低，確定會影響測定結果；原子化溫度過高又會影響石墨管的壽命。因此需要根據(jù)不同的儀器，優(yōu)化后確定實驗的參數(shù)。

5、怎樣解決樣品測定中重現(xiàn)性、精密性差的問題？

答：測量過程中重現(xiàn)性大多跟實驗人員的操作有關，建議加強對實驗操作人員的培訓，測量精密度差的問題多與儀器狀態(tài)有關，建議更換石墨管或調(diào)整進樣針，重新檢測。

6、如何消除儀器的記憶效應？

答：為了防止高濃度樣品溶液造成的記憶效應，做完高濃度樣品后，應在進行下一個樣品測定前干燒石墨爐體，以保證下一個樣品的準確性。

7、檢測時，需隨時回收試驗嗎？

答：在ppm水平進行檢測時，試劑及實驗操作都可能對檢測造成干擾，因此建議每次進行消解時，進行隨時回收試驗，控制隨機誤差，保證數(shù)據(jù)的可靠性。

8、回收率：參照食品檢測，做方法學研究時，設高、中、低三個濃度；定量限為低點、定量限的10倍為高點、限度附近為中點；做隨機回收率時只做限度附近一個點，是否可行？建議明確隨行回收率的具體做法。

答：方法回收率為高中低三個濃度，以2ppm濃度為中間濃度，隨行回收率取限度濃度即可。

9、對定量限的定義不明確，會造成不同的判別結果。

答：指導原則中提到的定量限為zui低要求，即為標準曲線的*個濃度點。

10、由于鉻含量測定微量元素檢查，實驗室環(huán)境和人員操作均可能對樣品帶來污染，建議添加紫菜等標準品作為參考物質(zhì)，減少僅有鉻作為加樣回收可能帶來的試驗評價誤差。

答：回收實驗一般能夠較好的反應測定誤差，如果能夠有質(zhì)控樣品隨行測定，對結果更有保證。但必須考慮到紫菜等標準物質(zhì)與膠囊樣品的基質(zhì)差異很大，在經(jīng)過必要對比試驗，證明不存在基質(zhì)干擾情況下，可以采用質(zhì)控樣品代替隨行回收實驗。

三、數(shù)據(jù)分析

1、藥典中標準曲線鉻的zui高濃度為80ng/ml，已經(jīng)超出了原子吸收分光光度計的量程，是否可以進行調(diào)整？

答：可以進行調(diào)整，標準曲線的范圍在0-80ng/ml范圍內(nèi)即可，zui高濃度視儀器情況而定。指導原則中指明線性范圍的zui低點和zui高點濃度不得小于10倍。

2、標準曲線的相關系數(shù)是否有zui低要求？

答：標準曲線的相關系數(shù)藥典無要求，但建議相關系數(shù)不低于0.99。

四、試劑、溶液

1、玻璃量瓶對鉻測定有影響，應采用什么材質(zhì)的塑料量瓶？

答：使用的塑料量瓶材質(zhì)應以不影響鉻的測量為準，推薦使用的塑料量瓶材質(zhì)為聚丙烯材質(zhì)。

2、標準品溶液配制后有質(zhì)保期嗎？

答：國家標準物質(zhì)鉻標準溶液打開后，須放入耐腐蝕的塑料容器中，密閉，置于冰箱中存放，時間不得超過1個月，鉻系列標準溶液應臨用新配。

3、如何確保消解罐清洗干凈了？

答：每次消解罐均可浸泡后用純化水洗凈；或用純化水洗凈后加入5ml硝酸空白消解，再用純化水洗凈后方可使用。每次消解均應制備試劑空白溶液，同時保證試劑空白溶液的吸光度值應小于標準曲線*濃度點的50%。

4、本實驗必須采用優(yōu)級純硝酸等試劑，并及時對試劑空白溶液進行考察。建議對硝酸等試劑要求進行規(guī)定。

答：參考中檢院中檢包材（2012）81號關于發(fā)布《明膠藥用空心膠囊鉻檢測方法指導原則》的通知中《明膠藥用空心膠囊鉻檢測方法指導原則》，在指導原則中已經(jīng)注冊，試劑如硝酸，需使用優(yōu)級純試劑或選取背景較低的試劑進行實驗，如選用達到要求的國產(chǎn)優(yōu)級純硝酸試劑（如國藥集團化學試劑有限公司生產(chǎn)的批號為80089291的硝酸），或者選用進口試劑，如MERCK公司的優(yōu)級純硝酸。